流式細胞術對細胞組織的各種參數(shù)分析是依據于單細胞,依據不一樣實體組織成分的特性能夠挑選出不一樣的分散細胞方法,以達到對單細胞產量高、細胞損害小的目的。
單細胞制備的機械或人工操作的可能會在一定程度上改變原有組織細胞的某些特性,所以,在處理不同細胞組織時,應盡量探索方法。單細胞懸液制備方法的應用可對細胞損傷小、產率高,且其還能較大程度的保留其細胞的原有特性。
實體組織單細胞懸液制備的機械法操作:
應用刀片切割粉碎細胞組織,用均漿機將其均勻打漿,用線注射針反復抽取細胞等,然后應用300目尼龍網過濾細胞將獲得制備后的單細胞懸液。
一、網搓法
1、把100目和300目的尼龍網系在一個小燒杯上
2、把剪切好的組織碎塊放在尼龍網上,用小鑷子輕輕的摩擦組織塊,并邊摩擦邊用生理鹽水對其進行沖洗,直至組織被摩擦完
3、吸取收集細胞懸液,以500~800轉/分鐘的速度對其細胞組織進行離心沉淀幾分鐘
4、離心結束后,將其細胞固定或低溫進行儲存
二、剪切法
1、把組織塊放在平皿里,在加少量的生理鹽水。
2、將其組織剪切成均勻的漿狀,在其內添加10ml的鹽水。
3、用吸管吸取組織均勻的漿液,要先用100目的尼龍網將其過濾到試管中。
4、以1000轉/分鐘離心沉淀幾分鐘,然后用生理鹽水洗滌3次,每次以500~800轉/分鐘的低速短時間離心沉淀,去除細胞碎片。
5、選用300目的尼龍網對細胞進行過濾去除。
6、選擇合適的固定液或百分之70的冰乙醇等都可,將其細胞固定或低溫儲存以備后用。
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